俗话说：“工欲善其事，必先利其器”。想要在转录、基因表达等相关研究中取得好的结果，RNA提取质量是整个实验成功的基础。

敲黑板，细胞RNA提取重点有三：

    样品细胞或组织的有效裂解；

    去除蛋白，抑制内源RNase活性；

    有效分离RNA与DNA；

一、培养细胞的有效裂解

培养细胞RNA存在于细胞质中，想要获取RNA，需要首先破除细胞膜，释放细胞质中的RNA。

针对培养细胞的有效破碎，目前常见的处理方法是直接加裂解液裂解细胞。

裂解常见问题包括：

1、裂解液的质量；

2、裂解液用量不足，RNA释放不充分；

3、组织裂解不充分；

4、未涡旋或吹打打散，影响裂解率；

二、去除蛋白质，抑制内源RNase活性

细胞裂解之后，裂解液中除了我们实验所需的RNA之外，DNA、蛋白质（包括RNase）等杂质都需要我们去除。

（一）去除蛋白质

从培养细胞中提取RNA，若未去除蛋白质或有蛋白质残留，将会造OD260/OD280<1.8。

提取RNA常用磁珠法和试剂盒中的蛋白酶K去除蛋白质。

1、磁珠法

运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠，该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合，通过洗涤、洗脱，去除蛋白质。

2、蛋白酶K

RNA提取试剂盒中含有蛋白酶K，可高效去除蛋白质。但蛋白酶K需要分装冻存，避免反复使用冻存失活，并减少污染。

（二）抑制内源RNase活性

RNase几乎无处不在，且特别稳定，内源性RNase是造成RNA降解的主要原因。

若RNA发生降解，会导致OD260/OD280>2.1，并在后续反转录得到的CDNA用于qPCR实验时，可能会导致Ct值偏大甚至没有Ct值。

现有的RNA抽提试剂，都含有快速抑制RNase的成分。在培养细胞中加入裂解液，细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的RNase，所以RNA得以保持完整。

三、有效分离RNA与DNA

如果提取的RNA中含有DNA残留，会造成OD260/OD280<1.8。

RNA与DNA分离的方法：

（1）提取液中加入NaOH溶液

RNA可溶于NaOH溶液，而DNA不可溶，离心后的上清液就可获得纯净的RNA.

（2）试剂盒提取

试剂盒中含有DNsae、DNaseⅠ稀释液，用于溶解DNA。

另外，为得到良好的下游实验结果，核酸提取出来后，不管是否立即做下游实验，都需要进行分装冻存，避免反复冻存造成降解，并减少污染风险。

四、RNA提取得率低的其它原因

除了上述三个原因之外，另外还有几个原因可能导致RNA提取得率低：

（1）细胞中RNA含量偏低；

（2）样品量太少；